小说涯

第六章 综合技能训练02（第2页）

弃去

1％红细胞悬液25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl

感作置振**器上混匀1～2min，放37℃静置15min

结果例示#######++----

#表示100％完全凝集++表示50％凝集-表示不凝集

结果判定：将反应板倾斜成45。角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。

能使100％红细胞凝集的病毒液的最高稀释倍数，称为该病毒液的红细胞凝集效价。如上例：病毒液的HA效价为1:128，HI试验时，病毒抗原液25μl内须含4个凝集单位，则应将原病毒液做成1284＝32倍的稀释液。

（2）红细胞凝集抑制试验（HI试验）。有试管法和微量法两种，现以常用的微量法进行说明。

①用微量移液器每孔各加入1滴稀释液（即25μl），从第1孔到第10孔。第1l孔加稀释液2滴（50μl）。

②以微量移液器取被检血清25μl，放入第1孔，，吸头浸于**中缓慢吸吹几次使被检血清与稀释液混合均匀，再吸取25μl**小心地移至第2孔，如此连续稀释至第10孔，最后第十孔吸取25μl**弃掉；被检血清稀释倍数依为1:2～1:1024，第11孔为红细胞对照，第12孔为抗原对照。

③每孔再加入含有四个单位的病毒液1滴（25μl）至第10孔，第1l孔为红细胞对照孔，不加病毒液；第12孔为抗原对照，加病毒液。

④置振**器上振**l～2min后，放37℃静置20min。

⑤每孔再加入1。0％红细胞悬浮液1滴（25μl）放振**器上振**l～2min混匀，置37℃，15min后判定结果。

表2新城疫红细胞凝集抑制（h1）试验（微量法）

孔号123456789101112

被检血清稀释倍数1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:1024红细胞

对照抗原

对照

生理盐水25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl50μl25μl

被检血清25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl

弃掉

4单位病毒液25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl

振**器上振**1～2min，放37℃作用20min

1%红细胞悬液25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl25μl

振**器上振**1～2min，放37℃作用15min

结果例示-------++##-#

注：-表示不凝集、++表示部分凝集、#表示完全凝集。

结果判定：将反应板倾斜成45。角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。

能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数（㏒2）表示。如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：128或HI效价为7（㏒2）。

结果分析：

①一般认为鸡的免疫临界水平为1:8（成年）或1:16（雏鸡），随地区不同而稍有差异。

②鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下，须进行新城疫疫苗接种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。

③鸡群的HI抗体水平是以抽检样品的HI抗体效价（㏒2）的平均值表示的。

如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价（㏒2）为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平均值为：

（8×3＋7×5＋6×2）（3＋5＋2）＝7。1平均水平在4（㏒2）以上，说明该鸡群为免疫鸡群。若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太大时，则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百分比决定免疫与否。

④大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0。1％～0。5％；小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2。0％。

⑤鸡群接种新城疫疫苗后，经2～3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。

五、作业